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一抗: 可以特異結(jié)合底物,就是識(shí)別出我們想要檢測(cè)的東西。一抗和底物結(jié)合與否用肉眼是看不出來(lái)的。
一抗的選擇要點(diǎn):
1. 一般單克隆抗體特異性強(qiáng),但親和力相對(duì)小,檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)低;而多克隆抗體特異性弱,但抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可通過(guò)封閉來(lái)避免)。
2. 抗體的比例可依據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)或western blot的抗體比例來(lái)做即可。3. 對(duì)于組織樣本,一般要在37℃孵育1-2h 或4℃冰箱孵育*(效果*,且拿出后需37℃復(fù)溫45min),并保持濕盒里的濕度來(lái)防止抗體蒸發(fā)。對(duì)于難以著色的,在第二天還需將濕盒置于室溫孵育。
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